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Meilunbio 细胞膜探针系列重磅产品
MB6190 DiD细胞膜荧光探针红色
（DiD Perchlorate）10MG [¥400.00]
MB4239 DiO细胞膜荧光探针绿色
（DiO perchlorate）10MG [¥400.00]
MB4240 DiI细胞膜荧光探针橙红色
（Dii perchlorate）10MG [¥400.00]
MB12482 DiR细胞膜荧光探针;DiR碘化物
（DiR iodide）25MG [¥980.00]
染料 DiD, DiI, DiO 和 DiR 是一类亲脂性荧光染料家族，用于标记细胞膜等脂溶性生物结构和疏水性组织。这是一类环境敏感型荧光染料，当它们与膜结合或者与亲脂性生物分子（例如蛋白质，虽然在水中其荧光强度很弱）结合时，其荧光强度显著增强。它们具有很高的淬灭系数，偏光依赖性和很短的激发寿命。一旦应用于细胞中，这种染料会在细胞内质膜中逐步扩散，导致在其最佳浓度条件下，将整个细胞膜染色。它们不同的荧光颜色：DiI（橙色荧光）、DiO（绿色荧光）、DiD（红色荧光）、DiR（深红色荧光），为活细胞多色彩荧光成像分析和流式细胞术提供了一种便捷的工具。
图1. 四种细胞膜荧光探针镶嵌磷脂双分子层的发射波长
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货号 |
品名 |
荧光颜色 |
分子量 |
Ex (nm) |
Em (nm) |
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MB6190 |
DiD细胞膜红色荧光探针 |
红色 |
959.91 |
644 |
663 |
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特点 |
DiD（红色荧光）可以用来对活细胞进行成像和流式分析。DiD可以用633 nm He–Ne 激光器激发，有着比 DiI 更长的激发波长和发射波长，为标记具有显着内在荧光的细胞和组织提供了有价值的替代方案。 |
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应用实测 |
本品配成 5mM 溶液后为深蓝色液体溶液，澄清且无可见异物； 进行荧光染色检测：工作条件：荧光显微镜，C6 细胞，400×，工作浓度 5μM。 结果：经细胞膜荧光染色，在40倍物镜下可看到清晰红色荧光。
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MB4239 |
DiO细胞膜绿色荧光探针 |
绿色 |
881.72 |
482 |
500 |
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特点 |
DiO可以使用标准的FITC滤光器。DiO通常不会明显影响细胞的生存力，因此被广泛用于正向或逆向的，活的或固定的神经等细胞或组织的示踪剂或长期示踪剂(long-term tracer)。除了最简单的细胞膜荧光标记外，还可以用于检测细胞的融合和粘附，检测发育或移植过程中细胞迁移，通过FRAP检测脂在细胞膜上的扩散，检测细胞毒性和标记脂蛋白等。 |
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应用实测 |
本品配成 5mM 溶液后为黄色液体溶液，澄清且无可见异物；进行荧光染色检测：工作条件：荧光显微镜，NIH/3T3 细胞，400×，工作浓度 5μM。 结果：经细胞膜荧光染色，在40倍物镜下可看到清晰绿色荧光。
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MB4240 |
DiI细胞膜橙红色荧光探针 |
橙红色 |
933.88 |
550 |
567 |
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特点 |
DiI 即 DiIC18(3)，可以使用标准的TRITC滤光器。DiI比DiO更亮。DiI通常不会影响细胞的生存力，因此被广泛用于正向或逆向的，活的或固定的神经等细胞或组织的示踪剂或长期示踪剂(long-term tracer)。被DiI标记的神经细胞在体外培养的条件下可以存活长达4周，在体内可以长达一年。DiI在经过固定的神经元细胞膜上的迁移速率为0.2-0.6mm/day，在活的神经元细胞膜上的的迁移速率为6mm/day。DiI除了最简单的细胞膜荧光标记外，还可以用于检测细胞的融合和粘附，检测发育或移植过程中细胞迁移，通过FRAP检测脂在细胞膜上的扩散，检测细胞毒性和标记脂蛋白等。 |
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应用实测 |
本品配成 5mM 溶液后为紫粉色液体溶液，澄清且无可见异物； 进行荧光染色检测：工作条件：荧光显微镜，C6 细胞，400×，工作浓度 5μM。 结果：经细胞膜荧光染色，在40倍物镜下可看到清晰橙红色荧光。
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MB12482 |
DiR细胞膜荧光探针;DiR碘化物 |
深红色 |
1013.39 |
748 |
780 |
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特点 |
DiR在活体成像或者示踪中非常有用，因为其所发射的红外光可以高效地穿过细胞和组织，并且在红外光范围内，其本底荧光水平很低。DiR 的两个18-碳链插入到细胞膜，从而进行特定的、稳定的细胞染色，几乎不会发生细胞间的染料转移。 |
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应用实测 |
用DIR-RGD-NP界定肿瘤相关血管 (A) Delineation of tumor vascularity. White light image of tumors showing the outline of tumor-associated vasculature only when dye was administered in RGD-coated nanoparticles; (B) Ex vivo imaging and colocalization of mCherry and DIR signals in dissected tumors (from top: 2mm, 5mm, and 10mm in size). Source: Novel approach for the detection of intraperitoneal micrometastasis using an ovarian cancer mouse model by Alvero et al., Scientific Reports, Jan. 2017.
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操作方法
1. 染色液制备
（1）配置DMSO或EtOH 储存液：储存液用 DMSO或EtOH配置浓度1～5 mM。
【注】未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融。
（2）工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或PBS）稀释储存液，配制浓度为1～5 μM的工作液。
【注】工作液最终浓度建议根据不同细胞系和实验体系来优化。建议从推荐浓度的10倍范围内开始最优浓度的摸索。
2. 悬浮细胞染色
（1）加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为1×106/mL。
（2）37 ℃孵育细胞 2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
（3）孵育结束，按1000～1500 rpm离心5min。
（4）倾倒上清液，再次缓慢加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。
（5）重复（3），（4）步骤两次以上。
3. 贴壁细胞的染色
（1）将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。
（2）从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，将盖玻片放在潮湿的环境中。
（3）在盖玻片的一角加入100μL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
（4）37 ℃孵育细胞 2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
（5）吸干染料工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育5～10min，然后吸干培养基。
4. 显微镜检测
DiD，DiO，DiI，DiR选择合适的滤光器观察。
5.流式细胞仪检测
经DiD，DiO，DiI，DiR染色的细胞可分别用流式细胞仪的FL1，FL2，FL3或FL4通道检测
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