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双酶检测试剂盒常见问题 查看详情问：
1）. 酶标仪检测，酶标仪的设置条件是什么？
需要选择化学发光模式
2）.双酶检测范围
双酶是在转录水平上的检测
3）.转染是瞬转还是稳转？
美仑对应检测的是瞬转的
4）可以用于植物么？
闪光型(MA0517)，只要细胞充分破碎，都可以用；因为是先提蛋白，再检测，所以可以用于植物；辉光型(MA0519)，原位裂解肯定破碎不充分，所以才针对哺乳动物细胞使用，植物最好不用，第一可能裂解不充分，第二没有数据支撑。
答：1）. 酶标仪检测，酶标仪的设置条件是什么？
需要选择化学发光模式
2）.双酶检测范围
双酶是在转录水平上的检测
3）.转染是瞬转还是稳转？
美仑对应检测的是瞬转的
4）可以用于植物么？
闪光型(MA0517)，只要细胞充分破碎，都可以用；因为是先提蛋白，再检测，所以可以用于植物；辉光型(MA0519)，原位裂解肯定破碎不充分，所以才针对哺乳动物细胞使用，植物最好不用，第一可能裂解不充分，第二没有数据支撑。
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Cy5跟Cy5-NH酯有什么区别？ 查看详情问：
Cy5是一种用于标记肽, 蛋白质, 寡核苷酸的氨基基团的反应染料。 激发波长 (nm): 648, 发射波长 (nm): 662. Cy5-NH酯更广泛应用于多肽，蛋白，核苷酸等，还能用于纳米材料等；EX激发波长 646 nm EM发射波长 664nm；Cy5一般是用水溶解的，如果是易降解的蛋白质，当使用DMF或DMSO是不可取的，需要用Cy5-NH酯，如需要氨基反应探针可选择Cy5-NH酯，Cy5-NH也可以用水溶。
答：Cy5是一种用于标记肽, 蛋白质, 寡核苷酸的氨基基团的反应染料。 激发波长 (nm): 648, 发射波长 (nm): 662. Cy5-NH酯更广泛应用于多肽，蛋白，核苷酸等，还能用于纳米材料等；EX激发波长 646 nm EM发射波长 664nm；Cy5一般是用水溶解的，如果是易降解的蛋白质，当使用DMF或DMSO是不可取的，需要用Cy5-NH酯，如需要氨基反应探针可选择Cy5-NH酯，Cy5-NH也可以用水溶。 -
购买美仑复苏好的细胞，注意事项 查看详情问：
收到细胞后, 显微镜下观察细胞形态是否正常，对于贴壁细胞则要注意看贴壁情况是否良好，观察细胞密度，确认细 胞无异常, 用 75%酒精对培养瓶表面进行消毒处理，将培养瓶置于细胞培养箱中静置培养 3-4 小时，以恢复细胞 状态，如果细胞密度不高，建议过夜培养。若细胞密度超过 80%，则可以根据以下提供的传代步骤进行传代；若细胞密度未达到 80%，则先吸除 原来培养瓶中大部分的培养基，留下 5-10ml 左右，稍微拧松瓶盖，继续放入细胞培养箱中培养，直到细 胞密度超过 80%时再进行传代。中途如觉得细胞长的较缓慢，可向培养瓶中添加5%的血清。
答：收到细胞后, 显微镜下观察细胞形态是否正常，对于贴壁细胞则要注意看贴壁情况是否良好，观察细胞密度，确认细 胞无异常, 用 75%酒精对培养瓶表面进行消毒处理，将培养瓶置于细胞培养箱中静置培养 3-4 小时，以恢复细胞 状态，如果细胞密度不高，建议过夜培养。若细胞密度超过 80%，则可以根据以下提供的传代步骤进行传代；若细胞密度未达到 80%，则先吸除 原来培养瓶中大部分的培养基，留下 5-10ml 左右，稍微拧松瓶盖，继续放入细胞培养箱中培养，直到细 胞密度超过 80%时再进行传代。中途如觉得细胞长的较缓慢，可向培养瓶中添加5%的血清。 -
酵母培养基和酵母粉区别？ 查看详情问：
酵母培养基是一大类，包括YPD培养基，有些是用酵母粉配置的；具体配置哪种酵母培养基，可以找下对应配方。
答：酵母培养基是一大类，包括YPD培养基，有些是用酵母粉配置的；具体配置哪种酵母培养基，可以找下对应配方。 -
SOSG单线态氧荧光探针常见问题 查看详情问：
（1）单线态氧就是活性氧吗？
单线态氧属于活性氧，是普通氧的激发态。单线态氧虽不是自由基，但因解除了自旋限制所以反应活性远比普通氧高。
（2）SOSG甲醛溶液滴入水溶液中，会有荧光强度么？
SOSG甲醛溶液滴入水溶液中会有荧光强度的，水也是有单态氧的，有的话就有荧光强度。
（3）单线态氧加入甲醇最多能保存多久？
具体时间不确定，因为空气中有氧，无论是放甲醇中还是粉末，荧光强度都会一点点衰减，放-80低温衰减的会缓慢一点。
（4）能检测细胞里的单线态氧么？
不可以的，一般细胞检测活性氧用DCFH-DA探针较多。
（5）被检水溶液怎么制备？
用甲醇配成浓度约5mM的储液，即向每管100μg包装的小瓶里加入33µL甲醇。使用前立即准备本试剂的工作溶液，并在实验结束后丢弃任何多余的稀释试剂。SOSG单线态氧荧光探针适用于水环境，最佳稀释缓冲液和工作浓度应由经验确定，一般建议起始浓度范围是1~10µM。
答：（1）单线态氧就是活性氧吗？
单线态氧属于活性氧，是普通氧的激发态。单线态氧虽不是自由基，但因解除了自旋限制所以反应活性远比普通氧高。
（2）SOSG甲醛溶液滴入水溶液中，会有荧光强度么？
SOSG甲醛溶液滴入水溶液中会有荧光强度的，水也是有单态氧的，有的话就有荧光强度。
（3）单线态氧加入甲醇最多能保存多久？
具体时间不确定，因为空气中有氧，无论是放甲醇中还是粉末，荧光强度都会一点点衰减，放-80低温衰减的会缓慢一点。
（4）能检测细胞里的单线态氧么？
不可以的，一般细胞检测活性氧用DCFH-DA探针较多。
（5）被检水溶液怎么制备？
用甲醇配成浓度约5mM的储液，即向每管100μg包装的小瓶里加入33µL甲醇。使用前立即准备本试剂的工作溶液，并在实验结束后丢弃任何多余的稀释试剂。SOSG单线态氧荧光探针适用于水环境，最佳稀释缓冲液和工作浓度应由经验确定，一般建议起始浓度范围是1~10µM。
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外泌体试剂盒常见问题 查看详情问：
（1）提取方法，适用范围
我们外泌体试剂盒MA0403采用沉淀法，沉淀法适合WB检测，RT-PCR
（2）一次实验需要多少体积血清/血浆？
至少0.5 ml血清/血浆样本。更少的血清体积虽也可以提出外泌体，但产量可能较低，不满足后续实 验需求。
（3）本品提取的外泌体如何应用于下游实验？
可直接使用下一步实验的试剂处理离心后的沉淀。例如，可直接加入合适裂解液后，用移液器 吹打或使用匀浆器重悬沉淀后进入RNA和蛋白提取流程。如需重悬，可用适量1 × PBS重悬离 心后的沉淀。
（4）血清/血浆外泌体沉淀如何重悬？
血清提取的外泌体沉淀可使用适量1 × PBS或其他下游实验所需试剂进行重悬。沉淀重悬有时 会较为困难，若后续实验对外泌体的完整性无要求，可使用低速匀浆器进行重悬。
（5）细胞提取外泌体的注意事项
1）. 美仑公司MA0402适用于各种类型细胞培养液上清中外泌体的提取。为防止 FBS 中较多的牛外泌体造成污染，可在 细胞培养至 50%-70%左右更换无血清培养基或者不含外泌体的血清培养基，继续培养约 12~48h 后收集 上清使用。也可直接使用不含外泌体的血清培养基直接培养细胞，后续直接收集细胞培养液上清进行外泌 体提取。
2）. 一次实验需要多少体积细胞培养液取决于上清中外泌体的量，可能受细胞类型、状态、数目的影响各不 相同，根据实验需求决定样本起始量。
3）. 用固定角度的离心机离心时，需标记管子的摆放方向。一般样本中外泌体含量较少，离心后可能肉眼观 察不到沉淀，标记方向后，在重悬时将 1×PBS 朝离心管靠外侧的内壁反复吹打洗脱即可。
4）. 离心后的沉淀可用 100-200 μL 的 1×PBS 重悬后使用，也可使用下一步实验的试剂直接处理沉淀。 例如，可直接使用裂解液吹打重悬沉淀后进入 RNA、蛋白质提取流程。
答：（1）提取方法，适用范围
我们外泌体试剂盒MA0403采用沉淀法，沉淀法适合WB检测，RT-PCR
（2）一次实验需要多少体积血清/血浆？
至少0.5 ml血清/血浆样本。更少的血清体积虽也可以提出外泌体，但产量可能较低，不满足后续实 验需求。
（3）本品提取的外泌体如何应用于下游实验？
可直接使用下一步实验的试剂处理离心后的沉淀。例如，可直接加入合适裂解液后，用移液器 吹打或使用匀浆器重悬沉淀后进入RNA和蛋白提取流程。如需重悬，可用适量1 × PBS重悬离 心后的沉淀。
（4）血清/血浆外泌体沉淀如何重悬？
血清提取的外泌体沉淀可使用适量1 × PBS或其他下游实验所需试剂进行重悬。沉淀重悬有时 会较为困难，若后续实验对外泌体的完整性无要求，可使用低速匀浆器进行重悬。
（5）细胞提取外泌体的注意事项
1）. 美仑公司MA0402适用于各种类型细胞培养液上清中外泌体的提取。为防止 FBS 中较多的牛外泌体造成污染，可在 细胞培养至 50%-70%左右更换无血清培养基或者不含外泌体的血清培养基，继续培养约 12~48h 后收集 上清使用。也可直接使用不含外泌体的血清培养基直接培养细胞，后续直接收集细胞培养液上清进行外泌 体提取。
2）. 一次实验需要多少体积细胞培养液取决于上清中外泌体的量，可能受细胞类型、状态、数目的影响各不 相同，根据实验需求决定样本起始量。
3）. 用固定角度的离心机离心时，需标记管子的摆放方向。一般样本中外泌体含量较少，离心后可能肉眼观 察不到沉淀，标记方向后，在重悬时将 1×PBS 朝离心管靠外侧的内壁反复吹打洗脱即可。
4）. 离心后的沉淀可用 100-200 μL 的 1×PBS 重悬后使用，也可使用下一步实验的试剂直接处理沉淀。 例如，可直接使用裂解液吹打重悬沉淀后进入 RNA、蛋白质提取流程。
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细胞核染料DAPI、Hoechest33258、Hoechest33342区别 查看详情问：
DAPI是可以通过完整细胞膜的，可以染活细胞也可以染死细胞，但是因为DAPI是半透性的，染活细胞的效果没有染死细胞好。所以DAPI一般用来染固定后的细胞；Hoechst透膜性比DAPI好，染活细胞更常用, Hoechst33258容易透过细胞膜，而Hoechst33342多用于细胞凋亡检测，还可以PI和Hoechst33342双染做流式；另外，Hoechst33342的细胞毒性比Hoechst33258要小。
答：DAPI是可以通过完整细胞膜的，可以染活细胞也可以染死细胞，但是因为DAPI是半透性的，染活细胞的效果没有染死细胞好。所以DAPI一般用来染固定后的细胞；Hoechst透膜性比DAPI好，染活细胞更常用, Hoechst33258容易透过细胞膜，而Hoechst33342多用于细胞凋亡检测，还可以PI和Hoechst33342双染做流式；另外，Hoechst33342的细胞毒性比Hoechst33258要小。 -
有些绿色荧光的染料，用红光荧光的滤光片也能看到红色，是怎么回事呢？ 查看详情问：
市面上现在染料有的存在窜色现象，浓度稍大产生了聚合物沉淀，而改变了发射波长，建议：可以试下降低染色浓度，调整一下反应条件，这种情况会改善的。
答：市面上现在染料有的存在窜色现象，浓度稍大产生了聚合物沉淀，而改变了发射波长，建议：可以试下降低染色浓度，调整一下反应条件，这种情况会改善的。 -
细胞污染，真菌，细菌和黑胶虫，支原体对应处理试剂 查看详情问：
细菌：青霉素(25-100ug/ml)链霉素(25-100ug/ml) 、庆大霉素(10-100ug/ml)
真菌：MB1014两性霉素B
支原体：MA0340支原体清除试剂；MA0339支原体预防试剂；MA0144支原体检测试剂盒
黑胶虫：一般为血清原因，建议勤换液，PBS清洗，换瓶
答：细菌：青霉素(25-100ug/ml)链霉素(25-100ug/ml) 、庆大霉素(10-100ug/ml)
真菌：MB1014两性霉素B
支原体：MA0340支原体清除试剂；MA0339支原体预防试剂；MA0144支原体检测试剂盒
黑胶虫：一般为血清原因，建议勤换液，PBS清洗，换瓶
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溶酶体染料：溶酶体红色荧光探针(LysoTracker Red DND-99)（MB6041）/ 溶酶体绿色荧光探针(LysoSensor Green DND- 查看详情问：
荧光颜色不同、波长不同：MB6041为红色荧光（577nm，590nm），MB6042（504nm，511nm）和MB6043（443nm，505nm）为绿色荧光。
原理不同：MB6041该类探针是对活细胞酸性区式进行选择性染色的荧光染料。具有几大重要的特点，1）选择性标记酸性细胞器；2）纳摩尔级（nM）浓度即可有效标记活细胞；3）具有多色探针提供，可根据情况对样品进行多标实验。MB6042 LysoTracker结构上由一个荧光基团和相连的弱碱基构成，可自由穿过细胞膜，一般聚集在球形细胞器上，适用于观察溶酶体内部生物合成及相关发病机理。Lysotracker中性pH下仅仅发生部分质子化，因此该探针标记细胞器的原理可能与其完全质子化并滞留在细胞器膜上有关。MB6043 LysoSensor系列探针是主要对活细胞中的酸性区室（如溶酶体、顶体精子）动态合成和功能进行研究的一类荧光探针，该类探针的染色具有向酸性，可通过质子化作用在酸性细胞器内累积。该类探针的这种质子化作用还可解除染料的荧光淬灭性，使其所发射的荧光强度更强。因此，与LysoTracker系列探针相比，LysoSensor系列探针随着细胞器的酸化程度其荧光强度呈pH依赖型(向酸)增强。
需注意：MB6042溶酶体绿色荧光探针(LysoTracker Green DND-26) 染色后可以固定，且其维持时间长，要是做示踪的话更适合；MB6043溶酶体绿色荧光探针(LysoSensor Green DND-189) 不可固定，其依赖低pH，所以染色后固定会严重影响pH从而严重影响发光。同时也因为MB6043随着细胞器的酸化程度其荧光强度呈pH依赖型(向酸)增强，故此能看到颜色变化。
答：荧光颜色不同、波长不同：MB6041为红色荧光（577nm，590nm），MB6042（504nm，511nm）和MB6043（443nm，505nm）为绿色荧光。
原理不同：MB6041该类探针是对活细胞酸性区式进行选择性染色的荧光染料。具有几大重要的特点，1）选择性标记酸性细胞器；2）纳摩尔级（nM）浓度即可有效标记活细胞；3）具有多色探针提供，可根据情况对样品进行多标实验。MB6042 LysoTracker结构上由一个荧光基团和相连的弱碱基构成，可自由穿过细胞膜，一般聚集在球形细胞器上，适用于观察溶酶体内部生物合成及相关发病机理。Lysotracker中性pH下仅仅发生部分质子化，因此该探针标记细胞器的原理可能与其完全质子化并滞留在细胞器膜上有关。MB6043 LysoSensor系列探针是主要对活细胞中的酸性区室（如溶酶体、顶体精子）动态合成和功能进行研究的一类荧光探针，该类探针的染色具有向酸性，可通过质子化作用在酸性细胞器内累积。该类探针的这种质子化作用还可解除染料的荧光淬灭性，使其所发射的荧光强度更强。因此，与LysoTracker系列探针相比，LysoSensor系列探针随着细胞器的酸化程度其荧光强度呈pH依赖型(向酸)增强。
需注意：MB6042溶酶体绿色荧光探针(LysoTracker Green DND-26) 染色后可以固定，且其维持时间长，要是做示踪的话更适合；MB6043溶酶体绿色荧光探针(LysoSensor Green DND-189) 不可固定，其依赖低pH，所以染色后固定会严重影响pH从而严重影响发光。同时也因为MB6043随着细胞器的酸化程度其荧光强度呈pH依赖型(向酸)增强，故此能看到颜色变化。
