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线粒体荧光探针试剂盒：线粒体红色荧光探针(MitoTracker Red CMXRos)（MB6046）/ 线粒体绿色荧光探针(MitoTracker Gree 查看详情问：
MB6046/MB6044均为线粒体荧光探针，MB6044为绿色荧光（490nm，516nm），MB6046为红色荧光（579nm，599nm），两者均可染活细胞（不能染组织）。与MB6046不同的是，MB6044定位线粒体的能力不受线粒体膜电位的影响，但MB6044不适合于醛类固定，会使荧光信号丢失，因此更适合活细胞染色。而MB6046染色后可根究实验需求进行固定（醛类）和透化（Triton-100），探针依然维持在细胞内，且更适合双标实验。
答：MB6046/MB6044均为线粒体荧光探针，MB6044为绿色荧光（490nm，516nm），MB6046为红色荧光（579nm，599nm），两者均可染活细胞（不能染组织）。与MB6046不同的是，MB6044定位线粒体的能力不受线粒体膜电位的影响，但MB6044不适合于醛类固定，会使荧光信号丢失，因此更适合活细胞染色。而MB6046染色后可根究实验需求进行固定（醛类）和透化（Triton-100），探针依然维持在细胞内，且更适合双标实验。 -
Fura-2/Fluo-3/Fluo-4区别？ 查看详情问：
1、Fura-2 AM的荧光比较弱，最大激发波长为369 nm，最大发射波长为478 nm，并且其荧光不会随钙离子浓度改变而改变；Fura-2 AM进入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切形成Fura-2，从而被滞留在细胞内。Fura-2和钙离子结合后，最大激发波长为335 nm (最大激发波长随离子浓度的不同而有所不同)，最大发射波长为505 nm。
2、Fluo-3 AM进入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切形成Fluo-3，从而被滞留在细胞内。Fluo-3游离配体几乎是非荧光性的，其荧光不会随钙离子浓度升高而增强。Fluo-3可以和钙离子结合，结合钙离子后可以产生较强的荧光，最大激发波长为506 nm，最大发射波长为526 nm。实际检测时推荐使用的激发波长为488 nm左右，发射波长为525-530 nm。
3、Fluo-4 AM是最常用的检测细胞内钙离子浓度的荧光探针之一。Fluo-4 AM将Fluo-3 AM结构中的氯原子替换成了氟原子，导致它的最大激发波长会向短波长处偏离10 nm左右。这个波长更接近于氩激光器的波长488 nm，所以用氩激光器激发时，Fluo-4的荧光强度会比Fluo-3强一倍，Fluo-4可以和钙离子结合，结合钙离子后可以产生较强的荧光，最大激发波长为494 nm，最大发射波长为516 nm。Fluo-4 AM(钙离子荧光探针) 是配制于无水DMSO (anhydrous DMSO)中的储存母液，浓度为2mM。
答：1、Fura-2 AM的荧光比较弱，最大激发波长为369 nm，最大发射波长为478 nm，并且其荧光不会随钙离子浓度改变而改变；Fura-2 AM进入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切形成Fura-2，从而被滞留在细胞内。Fura-2和钙离子结合后，最大激发波长为335 nm (最大激发波长随离子浓度的不同而有所不同)，最大发射波长为505 nm。
2、Fluo-3 AM进入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切形成Fluo-3，从而被滞留在细胞内。Fluo-3游离配体几乎是非荧光性的，其荧光不会随钙离子浓度升高而增强。Fluo-3可以和钙离子结合，结合钙离子后可以产生较强的荧光，最大激发波长为506 nm，最大发射波长为526 nm。实际检测时推荐使用的激发波长为488 nm左右，发射波长为525-530 nm。
3、Fluo-4 AM是最常用的检测细胞内钙离子浓度的荧光探针之一。Fluo-4 AM将Fluo-3 AM结构中的氯原子替换成了氟原子，导致它的最大激发波长会向短波长处偏离10 nm左右。这个波长更接近于氩激光器的波长488 nm，所以用氩激光器激发时，Fluo-4的荧光强度会比Fluo-3强一倍，Fluo-4可以和钙离子结合，结合钙离子后可以产生较强的荧光，最大激发波长为494 nm，最大发射波长为516 nm。Fluo-4 AM(钙离子荧光探针) 是配制于无水DMSO (anhydrous DMSO)中的储存母液，浓度为2mM。
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细胞凋亡常见问题 查看详情问：
（1）Annexin V/PI试剂盒为什么用不含EDTA胰酶？
Annexin V 是 Ca 依赖性蛋白， 所以不能加入 EDTA， 防止 EDTA 螯合了 Ca 离子从而影响 Annexin V， 进而影响结果。
（2）Annexin V/PI试剂盒做单染用普通细胞还是凋亡细胞？单染一定要做么？
单染一定要做，需要画十字门调补偿单染可以用正常细胞做，但是正常细胞凋亡有的比较少，画门可能不是很清晰；建议设置经凋亡诱导的正常细胞、PI 单染和 Annexin V-FITC 单染 3 个对照组，正常细胞组可作为荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。结果可用 CellQuest等软件进行分析，绘制双色散点图（two-color dot plot），FITC 为横坐标，PI 为纵坐标。
（3）凋亡试剂盒Annexin V款受不受GFP等干扰？
美仑凋亡试剂盒有三款，Annexin V-FITC/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒；Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒；AnnexinV-PE/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒(50T)；其中货号MA0220，AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒，FITC发绿色荧光，PI发红色荧光；货号 MA0428 AnnexinV-FITC/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒中，将PI更换为了 7-AAD，也发红色荧光，但其发射光谱较PI窄，且发射波长更长，对其他检测通道的干扰更小；货号MA0429 AnnexinV-PE/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒，选择PE（MB5943藻红蛋白）与Annexin V 偶联，其中PE 的激发波长为为495,545或565nm ,发射波长575nm,发出红色荧光，在多色荧光分析中，在待检测的细胞已经表达GFP等绿色荧光蛋白的情况下，推荐客户选购Annexin V PE/7-AAD试剂盒。
（4）Annexin V-FITC/PI可以做贴壁细胞原位荧光检测吗?
美仑Annexin V-FITC/PI可以做原位荧光检测，注意：一定要用试剂盒里的buffer；染料加量适当提高。
（5）单纯检测磷脂酰丝氨酸暴露的情况，不需要染核，可以用Annexin V/PI（MA0220）试剂盒么？
可以用的，不染核的话,不用PI就行了
(6) 细胞活力(活死细胞染色)检测试剂盒和细胞凋亡检测试剂盒有什么区别？
细胞活力(活死细胞染色)检测试剂盒（MA0361）是区别活细胞总数和死细胞总数；死细胞包括：坏死，死亡，凋亡； 细胞凋亡检测试剂盒（MA0220）可以区别出活细胞，早期凋亡细胞，晚期凋亡细胞，坏死细胞
（7）TUNEL细胞凋亡检测试剂盒适用于组织切片吗？
可以用于组织切片，如果是新鲜组织，需要固定液固定，做成切片
（8）Tunel实验，加抗荧光衰减封片剂之后怎么保存呢？能保存多久？
常温；避光放就行；保存时间具体得看荧光，但是荧光总会衰减；一般两三天没问题。
（9）Tunel怎么计算凋亡指数?
在共聚焦下,凋亡率(凋亡指数)的计算方法如下:每个样品随机计数4个视野，按公式计算 凋亡指数(AI)：AI＝凋亡细胞数／(凋亡细胞数十正常细胞数)。统计学方法 结果采用x土s表示，多组样本均数用单因素方差分析，组间两两比较用Scheffe检验，两样本均数的比较用t检验.
（10）台盼蓝/活死细胞染色试剂盒区别
活死细胞染色试剂盒：Calcein AM是一种可对活细胞进行荧光标记的优良染色试剂，其能够轻易穿透活细胞膜。胞内的酯酶会将其水解为Calcein(钙黄绿素)留在胞内，发出强绿色荧光；而碘化丙啶（PI）不能穿过活细胞的细胞膜，但其能穿过死细胞膜的无序区域而到达细胞核，并嵌入细胞的DNA双螺旋从而产生红色荧光（激发：535 nm，发射：617nm），从而对死细胞染色。是基于钙黄素AM和碘化丙啶（PI）的活死细胞染色试剂盒，可用于动物细胞样品的活力和毒性检测。而台盼蓝是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性，还常用于检测细胞是否存活。活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成蓝色。
（11）细胞周期试剂盒（MA0334）细胞染色时间到了，但是来不及上流式怎么办？
可以先固定，加入 1ml PBS 充分重悬，成单细胞，轻轻边涡旋边缓慢滴加 3ml 预冷的无水乙醇，至 终浓度 75%，4℃固定 4h 以上，或者 4℃静置过夜（18-24h）效果更佳。固定后的细胞 可以-20℃保存一个月，之后检测时离心即可。
答：（1）Annexin V/PI试剂盒为什么用不含EDTA胰酶？
Annexin V 是 Ca 依赖性蛋白， 所以不能加入 EDTA， 防止 EDTA 螯合了 Ca 离子从而影响 Annexin V， 进而影响结果。
（2）Annexin V/PI试剂盒做单染用普通细胞还是凋亡细胞？单染一定要做么？
单染一定要做，需要画十字门调补偿单染可以用正常细胞做，但是正常细胞凋亡有的比较少，画门可能不是很清晰；建议设置经凋亡诱导的正常细胞、PI 单染和 Annexin V-FITC 单染 3 个对照组，正常细胞组可作为荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。结果可用 CellQuest等软件进行分析，绘制双色散点图（two-color dot plot），FITC 为横坐标，PI 为纵坐标。
（3）凋亡试剂盒Annexin V款受不受GFP等干扰？
美仑凋亡试剂盒有三款，Annexin V-FITC/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒；Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒；AnnexinV-PE/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒(50T)；其中货号MA0220，AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒，FITC发绿色荧光，PI发红色荧光；货号 MA0428 AnnexinV-FITC/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒中，将PI更换为了 7-AAD，也发红色荧光，但其发射光谱较PI窄，且发射波长更长，对其他检测通道的干扰更小；货号MA0429 AnnexinV-PE/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒，选择PE（MB5943藻红蛋白）与Annexin V 偶联，其中PE 的激发波长为为495,545或565nm ,发射波长575nm,发出红色荧光，在多色荧光分析中，在待检测的细胞已经表达GFP等绿色荧光蛋白的情况下，推荐客户选购Annexin V PE/7-AAD试剂盒。
（4）Annexin V-FITC/PI可以做贴壁细胞原位荧光检测吗?
美仑Annexin V-FITC/PI可以做原位荧光检测，注意：一定要用试剂盒里的buffer；染料加量适当提高。
（5）单纯检测磷脂酰丝氨酸暴露的情况，不需要染核，可以用Annexin V/PI（MA0220）试剂盒么？
可以用的，不染核的话,不用PI就行了
(6) 细胞活力(活死细胞染色)检测试剂盒和细胞凋亡检测试剂盒有什么区别？
细胞活力(活死细胞染色)检测试剂盒（MA0361）是区别活细胞总数和死细胞总数；死细胞包括：坏死，死亡，凋亡； 细胞凋亡检测试剂盒（MA0220）可以区别出活细胞，早期凋亡细胞，晚期凋亡细胞，坏死细胞
（7）TUNEL细胞凋亡检测试剂盒适用于组织切片吗？
可以用于组织切片，如果是新鲜组织，需要固定液固定，做成切片
（8）Tunel实验，加抗荧光衰减封片剂之后怎么保存呢？能保存多久？
常温；避光放就行；保存时间具体得看荧光，但是荧光总会衰减；一般两三天没问题。
（9）Tunel怎么计算凋亡指数?
在共聚焦下,凋亡率(凋亡指数)的计算方法如下:每个样品随机计数4个视野，按公式计算 凋亡指数(AI)：AI＝凋亡细胞数／(凋亡细胞数十正常细胞数)。统计学方法 结果采用x土s表示，多组样本均数用单因素方差分析，组间两两比较用Scheffe检验，两样本均数的比较用t检验.
（10）台盼蓝/活死细胞染色试剂盒区别
活死细胞染色试剂盒：Calcein AM是一种可对活细胞进行荧光标记的优良染色试剂，其能够轻易穿透活细胞膜。胞内的酯酶会将其水解为Calcein(钙黄绿素)留在胞内，发出强绿色荧光；而碘化丙啶（PI）不能穿过活细胞的细胞膜，但其能穿过死细胞膜的无序区域而到达细胞核，并嵌入细胞的DNA双螺旋从而产生红色荧光（激发：535 nm，发射：617nm），从而对死细胞染色。是基于钙黄素AM和碘化丙啶（PI）的活死细胞染色试剂盒，可用于动物细胞样品的活力和毒性检测。而台盼蓝是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性，还常用于检测细胞是否存活。活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成蓝色。
（11）细胞周期试剂盒（MA0334）细胞染色时间到了，但是来不及上流式怎么办？
可以先固定，加入 1ml PBS 充分重悬，成单细胞，轻轻边涡旋边缓慢滴加 3ml 预冷的无水乙醇，至 终浓度 75%，4℃固定 4h 以上，或者 4℃静置过夜（18-24h）效果更佳。固定后的细胞 可以-20℃保存一个月，之后检测时离心即可。
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细胞增殖常见问题 查看详情问：
（1）CCK-8对于不同的细胞，灵敏度是否一样？
不一样，悬浮细胞与贴壁细胞相比较难显色。对于贴壁细胞，一般加入CCK-8培养0.5-4小时吸光度已经很高，但对于悬浮细胞则可能吸光度较低，可以通过延长CCK-8的加入时间或增加细胞数量来解决。
（2）哪些物质会影响CCK-8的测定？
当有氧化还原性物质存在时会影响CCK-8的测定，因此当所加药物为氧化还原性物质时需要换液再进行检测。
（3）CCK-8试剂盒如何设定空白对照？
在不含细胞的培养基中加入CCK-8，培养一定的时间，测定450 nm的吸光度即为空白对照。在做加药实验(细胞毒性实验)时，还应考虑药物的吸收，可在不含细胞，加入药物的培养基中加入CCK-8，培养一定的时间，测定450 nm的吸光度作为空白对照。
（4）CCK-8试剂盒铺板细胞量有什么要求吗？
96孔板细胞计数的时候一般是104，我们铺96孔板，细胞浓度是5*104，取100ul铺板;可以您自己对细胞计数，保证每孔细胞数量一致。或者可以计数，方法：按不同细胞数铺板，贴壁后加cck，孵育1小时，然后检测，OD值在1.5左右是最佳铺板数
（5）CCK-8试剂盒反映时间怎么确定？数值必须是1么？
0.1-2.5都可以，最佳是1.0左右
（6）CCK-8试剂盒细胞能一边培养一边检测？
培养一段时间测CCK-8，然后换液后可以接着养。
（7）做CCK-8经常有气泡，对吸光度有影响，有什么办法去除么？
有气泡，没办法去除，但是可以避免有气泡，加药时枪头抵着孔壁，慢点加液体，基本不会产生气泡，如有条件可将96孔板离心，这样气泡就会消失
（8）CCK-8试剂盒OD值偏高？
可以确认下培养时间，一般肉眼可见颜色变化即可检测
（9）CCK-8除了用酶标仪还可以用什么仪器？紫外分光光度计行么？
一般CCK-8都是用酶标仪，紫外分光光度计最好不用，因为紫外我没记错一次只能测一个孔吧，而且还得把孔内液体吸出来到紫外用的皿里，而且检测时间很长，CCK-8对孵育时间敏感，这样误差太大了
（10）CCK-8会导致细胞死亡吗？
CCK-8本身对细胞毒性特别小，作用时间长不会导致细胞都死亡，但是细胞长满了，本身代谢会引起细胞死亡
（11）CCK-8试剂盒每次测定的数值不一样，是什么原因？如何解决？
可能会有以下几个原因：
1)当在培养箱内培养时，培养板最外一圈的孔最容易干燥挥发，由于体积不准确而增加误差。一般情况下，最外一圈的孔只加培养基，不作为测定孔用。
2)有可能会因为CCK-8沾在壁上而产生误差，建议在加入CCK-8后，轻轻敲击培养板以帮助混匀。
3)每孔的细胞数量过多或过少。请预先在1,000~100,000个/孔范围内摸索条件。
4) 重复试验请保证孵育时间、接种细胞数相同。
(12)CCK-8试剂盒和EDU试剂盒区别：
如检测单个药的毒性推荐EDU，EDU检测增殖最准确的方法,因为他是检测DNA合成情况的，cck因为伴随代谢，有些药物影响到代谢，所以有时候最后测得的抑制率并不一定是和细胞毒性成正比的；但是DNA变化是准确的，而且可以用于流式
如前药物筛选化合物多的话建议用CCK-8,因为edu操作步骤比较复杂，不适合前期药物筛选，cck反映速度快，操作简单，适合前期实验
（13）EDU细胞孵育时间怎么确定？
时间可以去ATCC上看下细胞倍增时间，通常宜继续孵育细胞周期10%左右的时间。
（14）3%BSA作用是什么?
3%BSA作用封闭稳定荧光
（15）EDU试剂盒做流式怎么收集细胞呢？固定的细胞都是碎片了?
孵育完edu之后收集细胞，然后在固定，之后按照悬浮细胞往后做，每步均需要离心3200rpm/5min
（16） EdU染色之后，先用荧光显微镜测一下，再进行细胞核复染，再测一次呢，还是胞核染好了一起测就行？
都可以，可以染完edu，先用显微镜看下，然后在核复染，再看下；也可以染完edu，直接染核，然后在不同波长刺激下看。
（17）染完了要立即用荧光显微镜观察吗，可以放多久？
最好立即看，因为荧光有猝灭，如果想保存一段时间可以加封片剂，但是也建议先看一下在加封片剂，在观察，因为加封片剂荧光也是有所衰减的，肯定没有刚染完的好
（18）洗涤液通透液怎么配？
洗涤液是3gBSA加100ml的PBS；通透液TritonX是液体，也就是0.4ml到100mlPBS，配完放4度就行。
答：（1）CCK-8对于不同的细胞，灵敏度是否一样？
不一样，悬浮细胞与贴壁细胞相比较难显色。对于贴壁细胞，一般加入CCK-8培养0.5-4小时吸光度已经很高，但对于悬浮细胞则可能吸光度较低，可以通过延长CCK-8的加入时间或增加细胞数量来解决。
（2）哪些物质会影响CCK-8的测定？
当有氧化还原性物质存在时会影响CCK-8的测定，因此当所加药物为氧化还原性物质时需要换液再进行检测。
（3）CCK-8试剂盒如何设定空白对照？
在不含细胞的培养基中加入CCK-8，培养一定的时间，测定450 nm的吸光度即为空白对照。在做加药实验(细胞毒性实验)时，还应考虑药物的吸收，可在不含细胞，加入药物的培养基中加入CCK-8，培养一定的时间，测定450 nm的吸光度作为空白对照。
（4）CCK-8试剂盒铺板细胞量有什么要求吗？
96孔板细胞计数的时候一般是104，我们铺96孔板，细胞浓度是5*104，取100ul铺板;可以您自己对细胞计数，保证每孔细胞数量一致。或者可以计数，方法：按不同细胞数铺板，贴壁后加cck，孵育1小时，然后检测，OD值在1.5左右是最佳铺板数
（5）CCK-8试剂盒反映时间怎么确定？数值必须是1么？
0.1-2.5都可以，最佳是1.0左右
（6）CCK-8试剂盒细胞能一边培养一边检测？
培养一段时间测CCK-8，然后换液后可以接着养。
（7）做CCK-8经常有气泡，对吸光度有影响，有什么办法去除么？
有气泡，没办法去除，但是可以避免有气泡，加药时枪头抵着孔壁，慢点加液体，基本不会产生气泡，如有条件可将96孔板离心，这样气泡就会消失
（8）CCK-8试剂盒OD值偏高？
可以确认下培养时间，一般肉眼可见颜色变化即可检测
（9）CCK-8除了用酶标仪还可以用什么仪器？紫外分光光度计行么？
一般CCK-8都是用酶标仪，紫外分光光度计最好不用，因为紫外我没记错一次只能测一个孔吧，而且还得把孔内液体吸出来到紫外用的皿里，而且检测时间很长，CCK-8对孵育时间敏感，这样误差太大了
（10）CCK-8会导致细胞死亡吗？
CCK-8本身对细胞毒性特别小，作用时间长不会导致细胞都死亡，但是细胞长满了，本身代谢会引起细胞死亡
（11）CCK-8试剂盒每次测定的数值不一样，是什么原因？如何解决？
可能会有以下几个原因：
1)当在培养箱内培养时，培养板最外一圈的孔最容易干燥挥发，由于体积不准确而增加误差。一般情况下，最外一圈的孔只加培养基，不作为测定孔用。
2)有可能会因为CCK-8沾在壁上而产生误差，建议在加入CCK-8后，轻轻敲击培养板以帮助混匀。
3)每孔的细胞数量过多或过少。请预先在1,000~100,000个/孔范围内摸索条件。
4) 重复试验请保证孵育时间、接种细胞数相同。
(12)CCK-8试剂盒和EDU试剂盒区别：
如检测单个药的毒性推荐EDU，EDU检测增殖最准确的方法,因为他是检测DNA合成情况的，cck因为伴随代谢，有些药物影响到代谢，所以有时候最后测得的抑制率并不一定是和细胞毒性成正比的；但是DNA变化是准确的，而且可以用于流式
如前药物筛选化合物多的话建议用CCK-8,因为edu操作步骤比较复杂，不适合前期药物筛选，cck反映速度快，操作简单，适合前期实验
（13）EDU细胞孵育时间怎么确定？
时间可以去ATCC上看下细胞倍增时间，通常宜继续孵育细胞周期10%左右的时间。
（14）3%BSA作用是什么?
3%BSA作用封闭稳定荧光
（15）EDU试剂盒做流式怎么收集细胞呢？固定的细胞都是碎片了?
孵育完edu之后收集细胞，然后在固定，之后按照悬浮细胞往后做，每步均需要离心3200rpm/5min
（16） EdU染色之后，先用荧光显微镜测一下，再进行细胞核复染，再测一次呢，还是胞核染好了一起测就行？
都可以，可以染完edu，先用显微镜看下，然后在核复染，再看下；也可以染完edu，直接染核，然后在不同波长刺激下看。
（17）染完了要立即用荧光显微镜观察吗，可以放多久？
最好立即看，因为荧光有猝灭，如果想保存一段时间可以加封片剂，但是也建议先看一下在加封片剂，在观察，因为加封片剂荧光也是有所衰减的，肯定没有刚染完的好
（18）洗涤液通透液怎么配？
洗涤液是3gBSA加100ml的PBS；通透液TritonX是液体，也就是0.4ml到100mlPBS，配完放4度就行。
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WB常见问题 查看详情问：
(1) 内参过爆
大连美仑ECL是飞克级的，灵敏度比较高，内参蛋白的话，建议使用的时候减少ECL用量，如果能调节时间的话，尽量时间短一些，如果手动曝光的话就1-2s就可以，一抗洗膜时间和洗膜次数可以适当延长
（2）曝光磷酸化蛋白比较模糊
可能原因：
1）因为磷酸化蛋白本身含量就少，特异性在不好，很容易出现这样的条带，抗体一定要买好一点的
2）目的蛋白如果较大，转膜时间要延长，适当调整转膜时间
3）适当调高一抗二抗稀释倍数
4）磷酸化封闭用tris体系的BSA，封闭时间可以长一点。
（3）预制胶两边marker有些倾斜或者不在同一条线上
预制胶存在边缘效应，样本允许的条件下可以把两边空出来，或者上一些废样做保护
（4）样本-20℃放了一年了，还能用么？效果会不会有影响？
组织久了，效果会有点影响，但是不好说影响大不大，WB也是需要看具体蛋白情况，有些蛋白可能就是不好跑，您可以先做下预实验，挑选几个样本，跑个内参，看下蛋白弥散不？如果弥散了其他目的蛋白肯定也不好了，如果不弥散，还可以的话可以做下目的蛋白，但这个检测只能说明样本还能跑蛋白，但是不保证每个目的蛋白都一定能跑好
（5）loading buffer 加没加蛋白酶抑制剂？
美仑的loading buffer 没加蛋白酶抑制剂，蛋白酶抑制剂是在蛋白提取的时候加的，这只是一个上样的缓冲液；缓冲液在没有稀释前，有高浓度的变性剂，蛋白酶是无法存在的
（6）蛋白印记膜再生液能否重复用？
试剂pH很重要，重复用会使pH升高，效果减弱，建议不要重复使用
（7）预制胶需要压样么？可以直接跑吗？
美仑预制胶不用压样，直接跑就可以，电泳条件：150 V，30-40 min，当溴酚蓝指示带电泳至凝胶底部，或实验预定位置时，即可结束电泳。如果想得到更加清晰平直的条带，可降低电压至 100-120V，并适当延长电泳时间。当然压样也可以，条带可能会更加好看。
（8）sds-page用预制胶跑完不在一条线上？
可能原因：样品的蛋白浓度或者离子影响了迁移速度，上样量一样，但是蛋白浓度不一样，那么蛋白量就不一样，蛋白的量相对越多，跑的越慢，但是做蛋白表达不影响结果的；或者也可以：如果蛋白浓度差的多建议调整浓度，可以让蛋白量一致（比如都是20ug，根据蛋白浓度），调上样量，差的多的可以用上样缓冲液补.
（9）sds-page用预制胶跑完条带有点弯曲？
电泳的时候保证内槽液体不漏液，降低电泳电压，浓缩胶60V，分离胶80V,，如果方便可以放些冰块降温，上样前，样品重新煮一下，冷却离心，取上清
（10）sds-page用预制胶跑条带出现笑脸。
可能原因：电压高，迁移快，两边比中间慢，其实正常，想要改善可以调电压到80V。
（11）sds-page用预制胶跑条带出现哭脸
可能原因：蛋白堵塞，样本可能是有杂质堵住了胶孔，改善制样过程。
（12）预制胶电泳槽内槽加满电泳液后，如看到个别胶孔里有絮状物
用注射器或其他工具吸取电泳液轻轻吹打加样孔，以去除加样孔内残留的储存缓冲液和杂质，后在正常上样。
（13）预制胶跑胶过程出现黄化
麻烦核对一下电泳缓冲液，美仑预制胶HEPS体系，不可使用tris-甘氨酸体系缓冲液，1X 变性凝胶电泳液参考配方为：100 mMTris, 100 mM HEPES, 0.1% SDS, 2 mM EDTA。
（14）预制胶适用于哪些仪器？
美仑预制胶兼容性强，兼容目前市场各种mini电泳槽, 包括：Bio-Rad Mini-PROTEAN (II/3 /Tetra System)；Hoefer Mighty Small (SE250/SE260/SE280)；Life Technology Novex Mini-Cell (请与免费提供的特制挡板配合使用)；北京六一 DYCZ-25E、DYCZ-24DN、DYCZ-24K、DYCZ-24KS、DYCZ-24KF；君意东方 JY-SCZ2+；天能 VE180；以及其它胶板宽度在10cm的电泳槽。如是伯乐款仪器可以参考说明书中胶条反装，或者购买伯乐款专用
（15）裂解蛋白，呈果冻状，还有点胶状呢？
离心时间过长，基因组出来了，正常离心后，取上清就可以，DNA会在沉淀里面，12000rpm，或者重提的话裂解时间缩短一些。
（16）丽春红染膜效果不好？
可能原因
1）膜上蛋白太少了，丽春红识别率是要低于曝光的，可以正常曝光看下结果。
2）如果染膜之前用牛奶封闭过，封闭的蛋白染膜是不会在膜上的
答：(1) 内参过爆
大连美仑ECL是飞克级的，灵敏度比较高，内参蛋白的话，建议使用的时候减少ECL用量，如果能调节时间的话，尽量时间短一些，如果手动曝光的话就1-2s就可以，一抗洗膜时间和洗膜次数可以适当延长
（2）曝光磷酸化蛋白比较模糊
可能原因：
1）因为磷酸化蛋白本身含量就少，特异性在不好，很容易出现这样的条带，抗体一定要买好一点的
2）目的蛋白如果较大，转膜时间要延长，适当调整转膜时间
3）适当调高一抗二抗稀释倍数
4）磷酸化封闭用tris体系的BSA，封闭时间可以长一点。
（3）预制胶两边marker有些倾斜或者不在同一条线上
预制胶存在边缘效应，样本允许的条件下可以把两边空出来，或者上一些废样做保护
（4）样本-20℃放了一年了，还能用么？效果会不会有影响？
组织久了，效果会有点影响，但是不好说影响大不大，WB也是需要看具体蛋白情况，有些蛋白可能就是不好跑，您可以先做下预实验，挑选几个样本，跑个内参，看下蛋白弥散不？如果弥散了其他目的蛋白肯定也不好了，如果不弥散，还可以的话可以做下目的蛋白，但这个检测只能说明样本还能跑蛋白，但是不保证每个目的蛋白都一定能跑好
（5）loading buffer 加没加蛋白酶抑制剂？
美仑的loading buffer 没加蛋白酶抑制剂，蛋白酶抑制剂是在蛋白提取的时候加的，这只是一个上样的缓冲液；缓冲液在没有稀释前，有高浓度的变性剂，蛋白酶是无法存在的
（6）蛋白印记膜再生液能否重复用？
试剂pH很重要，重复用会使pH升高，效果减弱，建议不要重复使用
（7）预制胶需要压样么？可以直接跑吗？
美仑预制胶不用压样，直接跑就可以，电泳条件：150 V，30-40 min，当溴酚蓝指示带电泳至凝胶底部，或实验预定位置时，即可结束电泳。如果想得到更加清晰平直的条带，可降低电压至 100-120V，并适当延长电泳时间。当然压样也可以，条带可能会更加好看。
（8）sds-page用预制胶跑完不在一条线上？
可能原因：样品的蛋白浓度或者离子影响了迁移速度，上样量一样，但是蛋白浓度不一样，那么蛋白量就不一样，蛋白的量相对越多，跑的越慢，但是做蛋白表达不影响结果的；或者也可以：如果蛋白浓度差的多建议调整浓度，可以让蛋白量一致（比如都是20ug，根据蛋白浓度），调上样量，差的多的可以用上样缓冲液补.
（9）sds-page用预制胶跑完条带有点弯曲？
电泳的时候保证内槽液体不漏液，降低电泳电压，浓缩胶60V，分离胶80V,，如果方便可以放些冰块降温，上样前，样品重新煮一下，冷却离心，取上清
（10）sds-page用预制胶跑条带出现笑脸。
可能原因：电压高，迁移快，两边比中间慢，其实正常，想要改善可以调电压到80V。
（11）sds-page用预制胶跑条带出现哭脸
可能原因：蛋白堵塞，样本可能是有杂质堵住了胶孔，改善制样过程。
（12）预制胶电泳槽内槽加满电泳液后，如看到个别胶孔里有絮状物
用注射器或其他工具吸取电泳液轻轻吹打加样孔，以去除加样孔内残留的储存缓冲液和杂质，后在正常上样。
（13）预制胶跑胶过程出现黄化
麻烦核对一下电泳缓冲液，美仑预制胶HEPS体系，不可使用tris-甘氨酸体系缓冲液，1X 变性凝胶电泳液参考配方为：100 mMTris, 100 mM HEPES, 0.1% SDS, 2 mM EDTA。
（14）预制胶适用于哪些仪器？
美仑预制胶兼容性强，兼容目前市场各种mini电泳槽, 包括：Bio-Rad Mini-PROTEAN (II/3 /Tetra System)；Hoefer Mighty Small (SE250/SE260/SE280)；Life Technology Novex Mini-Cell (请与免费提供的特制挡板配合使用)；北京六一 DYCZ-25E、DYCZ-24DN、DYCZ-24K、DYCZ-24KS、DYCZ-24KF；君意东方 JY-SCZ2+；天能 VE180；以及其它胶板宽度在10cm的电泳槽。如是伯乐款仪器可以参考说明书中胶条反装，或者购买伯乐款专用
（15）裂解蛋白，呈果冻状，还有点胶状呢？
离心时间过长，基因组出来了，正常离心后，取上清就可以，DNA会在沉淀里面，12000rpm，或者重提的话裂解时间缩短一些。
（16）丽春红染膜效果不好？
可能原因
1）膜上蛋白太少了，丽春红识别率是要低于曝光的，可以正常曝光看下结果。
2）如果染膜之前用牛奶封闭过，封闭的蛋白染膜是不会在膜上的
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部分产品单位写的g，收到产品是液体？ 查看详情问：
部分产品由于本身熔点，自身性质，就是液体状态，例如肉桂醛，常温就是液体。
答：部分产品由于本身熔点，自身性质，就是液体状态，例如肉桂醛，常温就是液体。
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粉末状产品明明看到母液已经完全溶解了，稀释之后又有析出？ 查看详情问：
因为粉末在液体中有一定的溶解度，尤其有的粉末用有机试剂溶解后需要用PBS，水稀释，而产品本身不溶于水，这时候稀释就会有析出，可以母液配置完成后超声一下，稀释之后再超声水浴一下，这样基本可以溶解；如析出的结晶依然存在，那就是溶解度达不到，需要调整下溶解度。
答：因为粉末在液体中有一定的溶解度，尤其有的粉末用有机试剂溶解后需要用PBS，水稀释，而产品本身不溶于水，这时候稀释就会有析出，可以母液配置完成后超声一下，稀释之后再超声水浴一下，这样基本可以溶解；如析出的结晶依然存在，那就是溶解度达不到，需要调整下溶解度。 -
有些产品只能用DMSO溶解，给动物DMSO还需要小于5%，怎么办？ 查看详情问：
（1）超声水浴加速溶解（2）如果是灌胃方式给动物可以混悬液（3）可以选一些助溶剂例如PEG300，吐温80等。
答：（1）超声水浴加速溶解（2）如果是灌胃方式给动物可以混悬液（3）可以选一些助溶剂例如PEG300，吐温80等。 -
收到化合物颜色/包装/溶解度和之前不一样？ 查看详情问：
同一产品不同批次之间存在差异，这是正常现象，麻烦以收到本次产品的COA为主。
答：同一产品不同批次之间存在差异，这是正常现象，麻烦以收到本次产品的COA为主。
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收到产品感觉包装品是空的？ 查看详情问：
如果您购买的产品的量非常小，同时有些产品在冻干的过程中粘附在管壁上形成薄薄的一层，可能观察不到产品的存在。您可以加入指定溶剂（参照操作手册）并涡旋或超声震荡使之完全溶解。
对于蜡状或油状的产品很难取出称量它们的质量，我们建议您用合适的溶剂直接溶解该化合物；对于具有吸湿性的化合物，暴露在空气中会吸收水分，呈现液滴状，这种产品需要放置在干燥器中保存。
答：如果您购买的产品的量非常小，同时有些产品在冻干的过程中粘附在管壁上形成薄薄的一层，可能观察不到产品的存在。您可以加入指定溶剂（参照操作手册）并涡旋或超声震荡使之完全溶解。
对于蜡状或油状的产品很难取出称量它们的质量，我们建议您用合适的溶剂直接溶解该化合物；对于具有吸湿性的化合物，暴露在空气中会吸收水分，呈现液滴状，这种产品需要放置在干燥器中保存。
